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本制品是一种适用于活细胞细胞核染色的溶液。仅需染色10分钟就能用荧光显微镜观察到非常明亮的细胞核蓝色荧光染色。也适用于固定后的细胞或组织的细胞核染色。

Hoechst 33342是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33342染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33342也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。

• 本制品浓度经过百奥莱博的优化，确保可以满足活细胞染色及各种常规染色的需要。如需使用特定浓度的Hoechst 33342，请选购粉末装的Hoechst33342荧光染料。
  
• 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。
  
• 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。抗荧光淬灭封片液可以向百奥莱博订购。

• 对于活细胞或培养的组织：
  
  • 对于培养器皿内的活细胞或组织，在培养液中均匀滴加适量的100×Hoechst33342活细胞染色液至终浓度为1×，轻柔混匀。例如对于十二孔板中培养的细胞，每孔有1mL的培养液，每孔需要加入10μL 100×Hoechst33342活细胞染色液。培养液中的血清、酚红等都不会对染色产生干扰。
    
  • 在适宜于细胞培养的温度孵育10分钟。吸除含染料的培养液，用培养液或PBS洗涤2～3次即可在荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。具体示例见图1。如果对于染色效果的要求不是特别高，染色5分钟，用培养液或PBS洗涤1次即可在荧光显微镜下观察。为避免凋亡细胞随培养液或PBS被吸除，在吸除液体前，对于用多孔板中培养的细胞，最好用多孔板离心机离心一下以充分沉淀那些已经漂浮起来的凋亡细胞。
• 对于固定的细胞或组织：
  
  • 对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33342染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33342染色。
    
  • 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量用免疫染色洗涤液、PBS或生理盐水稀释至1×的本制品，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3～5分钟。
    
  • 吸除Hoechst 33342染色液，用免疫染色洗涤液、PBS或生理盐水洗涤2～3次，每次3～5分钟。
    
  • 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。